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ZH-CPP型CPP条件性位置偏爱视频分析系统 |
条件性位置偏爱实验（Conditioned Place Preference, CPP）实验是目前评价药物精神依赖性的经典实验模型，也是广泛应用于寻找抗觅药行为的有效工具。该实验将实验动物（大鼠、小鼠）置于条件性位置偏爱箱的白色观察区，并给予精神依赖性药物（例如吗啡），然后观察实验动物在条件性位置偏爱箱的黑色区和白色区的活动情况，白色区、黑色区以及其中的灰色
区之间有小门可供动物自由穿梭。动物每次处于给药区就会在药物奖赏性效应的作用下对黑色和白色区域产生位置上的偏好，其程度与药物的精神依赖性相关。
产品特点：
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最大可8只实验鼠同时进行实验，高效省时 |
标准化工业设计，硬件坚固耐用，结构合理，无异味。 |
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采用视频摄像跟踪技术，实现了实验过程的自动化 |
避免了人工计数引入的主观误差和对实验动物的干扰，实验结果真实可靠 |
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保留实验过程录像，实验者可回放人工校检 |
领先的核心算法，有效保证识别的抗干扰性和准确性 |
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以多种方式显示指标，提供轨迹图、轨迹坐标点和指标结果的导出功能 |
可导入到Excel，便于用户在Excel、SPSS、SAS等分析统计 |
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新型医用型隔音箱，最大程度的消除外界环境和实验人员的影响 |
分析灵活，支持时实分析与离线分析，支持定时终止和人工终止 |
大鼠偏爱箱参数
外形尺寸：720× 250× 320mm
左右箱尺寸：305× 250× 320mm
中箱尺寸：110× 250× 320mm
小鼠偏爱箱参数：
外形尺寸：400× 150× 200mm
左右箱尺寸：170× 150× 200mm
中箱尺寸：60× 150× 200mm
底部触觉方式：栅栏、平板、网格
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阳极损毁海马腹侧下托可减少成瘾大鼠的条件位置偏爱-临床医学论文 |
【摘要】目的：研究损毁腹侧海马下托（VSUB）是否能够阻止成瘾大鼠的条件位置偏爱(条件性位置偏爱视频系统,CPP条件性位置偏爱视频分析系统,CPP条件性位置偏爱箱).方法：雌性
SD 大鼠，经过吗啡强化训练使其形 成条件位置偏爱（CPP）（条件性位置偏爱视频系统,CPP条件性位置偏爱视频分析系统,CPP条件性位置偏爱箱）.CPP 形成并稳定之后，将大鼠分成3组：损毁组 20 只，接受双侧 VSUB 的直流电损毁；假手术组 10 只，接受与手术组相同的手术操作，但不通电流；空白对照组 10 只，不作任何处理.经过5d 的恢复，3 组大鼠再次测定CPP 时间，确定其药物渴求的程度.结果：行为学测试结束后，将样本灌注切片进行组织学评定，损毁组脑片组织缺损位置局限于 VSUB 区域.损毁组大鼠伴药箱停留时间明显减少［(93.1±26.0)s］，相对于假手术组［(10.1±4.5)s］和空白对照组［(5.1±4.1)s］的大鼠在伴药侧停留的时间减少量有显著性差异（P<0.05）.结论：VSUB 在大鼠对药物的渴求中起着非常重要的作用，损毁该部位可以阻止
成瘾大鼠的条件位置偏爱.
【关键词】条件位置偏爱；海马；电解损毁；吗啡依赖；药物渴求
0 引言 药物依赖是一种伴有心理的和神经生物学表现的慢性大脑功能紊乱. 大多数吸毒的患者都会在戒毒治疗（消除了身体依赖症状）一段时间后由于心理依赖的驱使而复吸.大鼠与人有着相似的复吸机制，主要有药物引燃、心理应激、伴随药物的条件刺激（例如熟悉的环境和人等）.Vorel 等［
1 ］在实验中以 Theta
波刺激海马腹侧下托（ventralsubiculum,VSUB）可以诱发大鼠的药物渴求，这一发现提示了 VSUB 在复吸发生中具有重要作用.
本实验采用条件位置偏爱（条件性位置偏爱箱,条件性位置偏爱视频系统,CPP条件性位置偏爱视频分析系统,CPP条件性位置偏爱箱）（conditionedplacepreference,CPP）时间作为衡量大鼠将药物作用与环境相联系的指标［2-3］，通过对比VSUB 损毁前后大鼠偏爱时间的变化，探讨VSUB 在吗啡依赖形成过程中的作用.
1 材料和方法
1.1 材料成年雌性SD 大鼠40 只，体质量220～250g（由第四军医大学试验动物中心提供）；大鼠立体定向手术固定头架（日本成茂公司 SR5）；有恒流输出的刺激器、隔离器、损毁电极（不锈钢材质，直径0.2mm，涂覆绝缘漆，尖端裸露0.5mm）、吗啡粉剂（青海制药厂生产，使用前以蒸馏水溶解配制成1g/L 的溶液）.按文献［4］的方法，大鼠的位置偏爱箱(条件性位置偏爱箱,条件性位置偏爱视频系统,CPP条件性位置偏爱视频分析系统,CPP条件性位置偏爱箱)包括A,B,C 三个独立的箱体，各箱体内地板材质及墙壁颜色图案均不相同.两个箱中均装有自动计时装置，当动物进入其中时，连接在箱外的计时器开始计时，累加动物在其中所处的时间，同时计数器会增加一个 数值，累加动物进入的次数，避免人为计时计数的误差.
1.2 方法
1.2.1 地点偏爱的建立大鼠实验前先单独饲养于笼中，光照时间从上午8 时至晚8 时模拟正常昼夜交（12h/12h）.每日进行4 次适应性抓握，两日后正式开始训练. 训练分①前测试阶段：测试大鼠的自然偏爱，将有天然偏爱的大鼠从样本中剔除.测试时升起通道隔板，使三箱连通，大鼠从 B箱放入，开启自动计时装置，记录 15min 内大鼠在 A,C 两箱内分别停留的时间以及穿越次数.测试期间，保证箱内光线、气味的一致以及周围环境的安静.测试结果记录成表.根据此阶段的测试结果，选择两侧偏爱时间相差<100s 的大鼠进入下一阶段.②训练阶段：用隔板封闭两箱间通道.每只大鼠于上午9 时和晚8 时各进行1 次皮下注射.其中1 次注 射吗啡（10mg/kg），另 1
次注射生理盐水 0.3mL.注射吗啡后大鼠放入 A 箱，注射生理盐水后大鼠放入 C
箱，均在箱中停留40min.重复训练 7d. ③测试阶段，操作与第①阶段所述相同，白箱时间增加值>100s 则认为动物产生了明显的偏爱，低于此值者不入选样本.穿越次数低于20 次的动物，说明运动不活跃，CPP 测量值误差较大，该动物剔除出样本.
1.2.2 动物分组将已经建立地点偏爱的大鼠完全随机分配至三个试验组.损毁组（20 只）；假手术组（10 只），只将电极插入，不做损毁；空白对照组（10 只），不做任何处理，笼养5d.
1.2.3 阳极损毁大鼠 10g/L
戊巴比妥钠腹内注射（50mg/kg），麻醉后固定于立体定向仪上，门齿杆位于耳间线下方 3.3mm，双侧 VSUB 颅骨表面投影点钻孔，将损毁电极依照大鼠脑立体定位图谱下至靶点，双侧坐标以 Bregma 为原点，AP-6.3mm,ML±5.2mm,DV-7.2mm
［5］，通直流电进行损毁，电极接直流电源阳极，电流（1mA），通电时间30s，完成后取出电极，缝合.全部手术均保证无菌操作，防止动物发生感染.动物术后恢复5d，之后进行行为测试.
1.2.4 术后地点偏爱测试与前述的地点偏爱测试方法相同，分别测试每只大鼠在A,C 两箱的停留时
间，记录成表.
1.2.5 组织学检查测试完成后，损毁组及假手术组大鼠在戊巴比妥钠深度麻醉下以生理盐水，10g/L多聚甲醛混合10g/L亚铁氰化钾，40g/L 多聚甲醛 PBS
溶液的顺序依次灌注，取脑，做冰冻切片（冠状，片厚60μ m），尼氏染色观察损伤范围. 统计学处理：CPP 测量结果以训练前后以及手术前后的白箱时间改变值作为统计量，数据处理使用 SPSS10.5 软件，采用配对 t 检验及单因素方差分析(OnewayANOVA)，显著性水平取α ＝0.05. 2
结果 2.1 组织学评定采用双盲法，由第三人在显微镜下观察神经缺损范围，将损毁位置不准确或损毁区域过大过小的个体从样本中去除.损毁位置组织学观察：损毁组损毁范围较准确的局限于双侧VSUB 区域内，损毁区内神经元及周围组织包括路过的纤维均已变性坏死，形成空洞，空洞周围组织镜下未见异常.这样的损伤在以 Bregma 为原点， AP5.80mm～7.02mm
范围内均能被观察到.假手术组仅见针道附近轻微损伤，VSUB 区域除针道外并无明显改变（图1）. 图1 腹侧海马下托损毁范围组织学检查 2.2CPP 测试大鼠在7d 的训练完成后，测定一次术前偏爱，各组大鼠在白箱停留时间增加值为(169.0±23.2)s，经检验，P<0.001，说明CPP 已经形成.在手术损毁VSUB
后，CPP 时间较术前有明显改变.损毁组白箱停留时间减少值为(93.1±26.0)s,而假手术组的伴药侧停留时间减少值为
(10.1±4.5)s，空白对照组伴药侧停留时间减少值为(5.1±
4.1)s.经单因素方差分析，各组间有显著差异，F=7.877，P=0.001.以 LSDt
检验再作组间两两比较，损毁组与假手术组（P<0.01），损毁组与空白对照组（P<0.001）均有显著差异，而假手术组与空白对照组（P=0.42）没有显著差异.以上结果说明阳极损毁 VSUB 可以降低大鼠对吗啡的条件位置偏爱. 3 讨论 本实验观察到手术损毁VSUB 对于抑制吗啡成瘾大鼠的位置偏爱
（条件性位置偏爱箱,条件性位置偏爱视频系统,CPP条件性位置偏爱视频分析系统,CPP条件性位置偏爱箱）有着明显的作用，并且从另一个角度支持边缘系统的谷氨酸能神经元在复吸表达中的重要作用.条件位置偏爱是用来衡量药物奖赏作用的一项指标［2］.药物心理依赖的形成过程，是给药→激活奖赏环路→产生欣快感→形成顽固记忆的过程.VSUB 是海马重要的输入输出结构，与许多脑区既有传入又有传出纤维的联系，这些脑区有些与奖赏环路关系密切，
有些则是大鼠感受外界信息的主要传入部位.Vorel 等［1］发现刺激 VSUB 区可诱发大鼠的药物渴求，在本实验中损毁 VSUB 区会使大鼠对伴药侧的偏爱程度明显减轻，提示 VSUB 在药物渴求的产生中起着重要作用.另外 Meyers 等［6］发现损伤海马的背侧可以抑制 CPP 的形成，而损伤腹侧则作用不明显，说明海马的背侧相对于腹侧更多参与了药物成瘾的获得过程.上述研究提示海马作为学习记忆环路中的一环，不管是在药物渴求的形成过程还是药物渴求的发生中，都起着极其重要的作用. ;对于防止复吸而言，阻止药物渴求的表达是关键.阻止渴求表达有两种途径，一是去除有关渴求的记忆内容，另一个就是阻断渴求记忆的提取表达过程.实验虽然证明了大脑是将用药感受的记忆和对药物的渴求单独存放在一个区域的，但对药物渴求的记忆究竟存储在哪里？它是与其他记忆混合存放还是单独储存？现在都还没有很确实的研究结论，所以第一种途径就无法实现［7］.而环境暗示所诱发的渴求的表达，海马及VSUB 可能参与其中. 损毁这个环节，使渴求无法提取并表达，就能起到阻止复吸，戒除心理依赖的效果.普通遗忘是因为大脑提取机制暂时失效引起的，而损毁VSUB 阻止渴求表达却是永久的，不可恢复的.相对于平时的遗忘，这种损毁所引起的结果对于消除渴求防止复吸来说正是我们希望得到的. 当然，对于VSUB 的功能，一定不仅仅限于是药物渴求的提
取通路，我们的实验所能说明的可能只是其许多功能中的一种.鉴于海马在学习记忆中的重要作用和不可替代的位置，单纯观察损毁 VSUB 对药物渴求的影响是远远不够的.损毁 VSUB 会有较严重的副作用么？这种损伤究竟对大脑功能有多大影响？这种影响相对于滥用药物引起的危害究竟谁轻谁重
，还需要进一步深入探讨，也是决定该方法能否作为一种治疗方法的关键.这些问题我们将在今后的工作中进一步研究.
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［ 7 ］ HoldenC.Zappingmemorycentertriggersdrugcraving
［J］.Science,2001,292:1039 【Abst r act
】AI M: Toi nvest i gat ewhet hert hevent r al subi
cul um( VSUB) l esi onscanr el
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METHODS: Femal eSDr at swer et r ai
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